学生時代ですと今頃の時期は、実験圃場のイネの刈り取り時期を気にしている頃ですが、今年は来月の学会の準備ばかりを気にしているバイオインフォマティクス事業部の久保（kubor）です。 さて、3回目のSeqCap Epi連載ですが、今回からはまだアメリエフブログ…

前回に引き続き、SeqCap Epi連載の第2回です。 今回は、SeqCap Epiによる実験データをどのように解析していくのか、ご紹介いたします。用いるソフトはすべてオープンソースのフリーウェアです。 このパイプラインでは、SeqCap Epi CpGiant Enrichment Kit（…

DNAのメチル化解析手法はこれまでマイクロアレイや、リアルタイムPCRを使用したものがありましたが、どれも解析可能なゲノム範囲に限りがありました。 しかし、NGS（次世代シーケンサー）を使用するSeqCap Epi CpGiant Enrichment Kit（ロシュ・ダイアグノス…

次世代シーケンサ解析では、リファレンスゲノムやbamファイルなど、サイズの大きなファイルを扱う必要があります。 大きなファイルには扱う前にインデックス（目次）を作成することがしばしばあります。多くのソフトはインデックスファイルがないと動きませ…

RNA-Seqを何度も実行している弊社の某社員が、先日 「bowtie、tophat、cufflinksの名前が紳士関連なのに気づいた」 と言っていたので「気づくの遅っ」と思ったのですが、 私には二十歳を過ぎてからサザエさんの登場人物名が海産物関係である ことに気付いた…

SomaticSniperについての続きです。 SomaticSniperを実際に動かしてみます。 SomaticSniperはCentOSでも問題なく動作しますが、Ubuntuでの使用が推奨されています。 基本的な実行コマンドは下の通りになります。 必要なファイルは腫瘍サンプルと、ペアとなる…

以前、heshiさんがSomatic Mutationを検出するツールについてのブログ記事を書かれましたが、そのうちSomaticSniperについて少しご紹介します。 ・論文:（SomaticSniper: identification of somatic point mutations in whole genome sequencing data. Bioin…

先日、構造多型を解析するツールについてご紹介しました。 (Paired-end/Split-read/Complex) これらのツールの一部は、解析の際、シーケンスデータのinsert sizeの入力が必要です。 自ら実験して得たデータならinsert sizeはわかると思いますが、公共のデー…

ヒト Exomeデータ解析の受託キャンペーンを開始いたします！ ご注文受付期間：2014.1.14〜3.31ご発注分まで 期間限定の特別価格でのご提供となりますので、Exomeデータ解析の外注をご検討されている方は、ぜひ一度弊社ホームページをご覧ください！ ご不明な…

VCFファイルの一番右側には、以下のようにジェノタイプ情報が記されています。 ---------------------------------------- #CHROM POS ID REF ALT QUAL FILTER INFO FORMAT NA00001 NA00002 NA00003 20 14370 rs6054257 G A 29 PASS NS=3;DP=14;AF=0.5;DB;H2…

これまで、ゲノムの構造多型を検出ツールのうち、split-readか、paired-endを用いているツールを紹介してきました。 どちらかの手法だけでなく、両方を合わせて使用するツールも存在します。 複数の検出方法を併用するメリットは、paired-end mappingによる…

Somatic Mutationを検出する主なツールを紹介します。 腫瘍サンプルと正常サンプルのBAM/Pileupファイル、リファレンスゲノムのFASTAファイルが入力ファイルとして必要です。 ・VarScan2(2012) 入力ファイルは、BAMファイルをSAMtoolsでPileupファイルに変換…

前回は、次世代シーケンスデータを用いて構造多型を検出するツールのうち、split-read mappingを用いているものを紹介しました。 今回の記事ではpair-end mappingを用いているツールをご紹介します。 MoDIL 10-50 bpのindelの検出ツールです。 ライブラリのI…

次世代シーケンスデータを用いて構造多型を検出するツールは、これまでに数多く登場しています。 そのうちのいくつかを簡単にご紹介いたします。 今回はSplit-read mappingを用いているツールです。 Pindel 論文が発表されたのは2009年ですが、最近でも頻繁…

前回に引き続き、今回は次世代シーケンサーを用いて構造多型（SV）を検出するもう一つの方法、Paired-end mappingを用いた方法についてご紹介します。 マップされなかったreadを用いていたSplit-read mappingと異なり、Paired-end mappingでは、マップされた…

構造多型の検出原理。この記事ではSplit-read mappingを用いる方法を解説します♪

構造多型(Structural Variation、SV) の種類一覧！

変異の絞り込み 【1】論文紹介 変異の絞り込み 【2】変異検出 変異の絞り込み 【3】候補の絞り込み方 変異の絞り込み 【4】公開データベースを用いた候補の絞り込み 変異の絞り込み 【4.5】お詫びと訂正 変異の絞り込み 【5】変異のクオリティとインパクト …

変異の絞り込み 【1】論文紹介 変異の絞り込み 【2】変異検出 変異の絞り込み 【3】候補の絞り込み方 変異の絞り込み 【4】公開データベースを用いた候補の絞り込み 変異の絞り込み 【4.5】お詫びと訂正 変異の絞り込み 【5】変異のクオリティとインパクト …

変異の絞り込み 【1】論文紹介 変異の絞り込み 【2】変異検出 変異の絞り込み 【3】候補の絞り込み方 変異の絞り込み 【4】公開データベースを用いた候補の絞り込み 変異の絞り込み 【4.5】お詫びと訂正 さて、前回に引き続き変異を絞り込んでいきます。 第3…

変異の絞り込み 【1】論文紹介 変異の絞り込み 【2】変異検出 変異の絞り込み 【3】候補の絞り込み方 変異の絞り込み 【4】公開データベースを用いた候補の絞り込み 第4回の記事の訂正です。 公開データベースを用いた絞り込みの例として、QmergeVCFでdbSNP…

変異の絞り込み 【1】論文紹介 変異の絞り込み 【2】変異検出 変異の絞り込み 【3】候補の絞り込み方 前回は、疾患関連変異候補の絞り込みの概要についてご説明しました。 今回の記事では、その絞り込みを実際にはどのように行うのか、ご紹介します。 絞り込…

シーケンシングデータをFastQCなどでチェックしていると アダプタ配列が混入しているのを見つけることがあります。 アダプタ除去ソフトウェアはいろいろありますが 今回は以下の3ソフトウェアの使い方をご紹介します。 cutadapt FastX-Toolkit（fastxclipper…

最も広く利用されているマッピングソフトの一つにbwaがあります。bwaは2011年にリリースされたバージョン0.6が広く使用されてきましたが、今年の2月末にバージョン0.7がリリースされました。0.7ではBWA-backtrack、BWA-SW、BWA-MEMの、三種類のアルゴリズム…

変異の絞り込み 【1】論文紹介 変異の絞り込み 【2】変異検出 前回は、LCA患者とその両親のトリオのfastqデータをダウンロードし、変異検出まで行いました。 今回は、主題である疾患関連変異候補の絞り込みについてお話します。 絞り込みの流れは、以下の通…

変異の絞り込み 【1】論文紹介 前回は、exome sequencingによりある家系においてレーバー先天黒内障（LCA）を引き起こしている原因変異を特定した論文についてご紹介しました。 今回は、その論文で使用されたデータから、変異検出を行った結果についてご紹介…

今回は、次世代シーケンサーを用いて検出した変異の絞り込み解析の具体例についてご紹介したいと思います。 次世代シーケンサーを用いた解析の難点のひとつに、多数の変異が検出されるため、目的の疾患に関連した遺伝子の探索が困難であることが挙げられます…

Plos Oneに出ていたExome家系解析の論文をご紹介します。 Wu CC, Lin YH, Lu YC, Chen PJ, Yang WS, Hsu CJ, Chen PL. Application of massively parallel sequencing to genetic diagnosis in multiplex families with idiopathic sensorineural hearing im…

ソフトウェア結果比較【BAMソート編・1】のつづきです。 前回、同じBAMをsamtools sortとSortSam.jar(picard)でソートしたところ、結果のBAMが異なりました。 異なる箇所を調べるため、まず結果BAMをsamtools view -hでSAMに変換しました。 【samtools sort…

本日は、弊社が slide share に新しく公開した「次世代シーケンス解析サーバー Reseq解析GUIマニュアル」をご紹介いたします。 この資料は、弊社で販売しております次世代シーケンスデータ解析サーバーのマニュアルの一部です。 Linux上であってもWindowsと…